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凋亡試劑盒的原理及現(xiàn)象分析點擊次數(shù)：1164 更新時間：2022-09-14
凋亡試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。
一、凋亡試劑盒的細胞凋亡原理：
細胞凋亡普遍存在于生物界，既發(fā)生于生理狀態(tài)下，也發(fā)生于病理狀態(tài)下。細胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生(morphogenesis)、組織內(nèi)正常細胞群的穩(wěn)定、機體的防御和免疫反應、疾病或中毒時引起的細胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進展起著重要作用。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于細胞膜的內(nèi)側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內(nèi)側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35.8KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素FITC標記，以標記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。
二、凋亡試劑盒的細胞凋亡現(xiàn)象：
細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
細胞凋亡過程的形態(tài)變化說明
細胞凋亡是個復雜的過程，我們在了解分析它的同時在記錄著它的細胞變化形態(tài)，由此我們將其變化的過程分為三個大的階段：
1.首先是是細胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，核糖體、線粒體等聚集，但結構無明顯改變，染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，嗜堿性增強，核固縮呈均一的致密物，進而斷裂，胞膜仍完整
2.其次就是胞膜不斷出芽、脫落，細胞變成數(shù)個大小不等的由膜包裹的凋亡小體(apoptotic bodies)。
3.凋亡小體被周圍具有吞噬功能的細胞如巨噬細胞、上皮細胞等吞噬、降解。在凋亡發(fā)生的全過程中，細胞膜一直保持完整，胞內(nèi)容物不釋放出來，所以不引起周圍的炎癥反應。同一組織中，不同細胞發(fā)生凋亡的過程并不同步。
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